Microdisección per captura làser

Transferència per microdisección per captura en làser de cèlules epiteliales pures del conducte mamari. El panel esquerre mostra una secció de teixit en cèlules seleccionades. El panel dret mostra cèlules epiteliales aïllades en la película de transferència.

La microdisección per captura làser (LCM per les seues sigles en anglés), també cridada microdisección, microdisección làser (LMD) o microdisección assistida per làser (LMD o LAM), és un método per a aïllar cèlules específiques d'interés de regions microscòpiques de teixits/cèlules/organismes (dissecció a escala microscòpica en l'ajuda d'un làser).

Principi

Erro al crear miniatura:

Neurona de la corfa Pre-frontal. A l'esquerra identificada dins d'un círcul. A la dreta espai buit despuix de la captura (ya seccionada).

La microdisección per captura làser (LCM) és un método per a obtindre subpoblaciones de cèlules tisulares baix visualisació microscòpica directa. La tecnologia LCM pot arreplegar directament les cèlules d'interés o aïllar cèlules específiques tallant les cèlules no desijades per a obtindre poblacions celulars enriquides histológicamente pures. Existix una gran varietat d'aplicacions posteriors: genotipado de ADN i anàlisis de pèrdua de heterocigosidad (LOH), perfilat de transcritos de ARN, generació de biblioteques de cDNA, descobriment de proteómica i perfils de rutes de señaleisació. El temps total necessari per a portar a terme este protocol sol ser d'1 a 1,5 h.

Extracció

Erro al crear miniatura:

Etapes de microdisección làser.

Un làser s'acopla a un microscopi i enfoca el teixit del portaobjetos. Per mig del moviment del làser per l'òptica o la platina, el foc seguix una trayectòria predefinida per l'usuari. A continuació, esta trayectòria, també cridada element, es retalla i se separa del teixit adjacent. Despuix del procés de tall, té que seguir un procés d'extracció si es desija. Tecnologies més recents utilisen la microdisección sense contacte.

Existixen vàries formes d'extraure teixit d'un portaobjetos en una mostra histopatológica. Es pressiona una superfície pegajosa sobre la mostra i s'arranca. Açò extrau la regió desijada, pero també pot eliminar partícules o teixit no desijat de la superfície, ya que esta no és selectiva. Es fon una membrana de plàstic sobre la mostra i s'arranca. La calor s'introduïx, per eixemple, per mig d'un làser roig o infrarrojo (IR) sobre una membrana teñir en un colorant absorbent. En adherir la mostra desijada a la membrana, com ocorre en qualsevol membrana que es coloca prop de la superfície de la mostra histopatológica, és possible que s'extraguen alguns restants. Un atre perill és la calor introduïda: Algunes molècules com el ADN, el ARN o les proteïnes no permeten ser calfades massa o en absolut en l'objectiu de ser aïllades de la forma més pura possible.

Per al transport sense contacte. Existixen tres enfocaments diferents. Transport per gravetat utilisant un microscopi vertical (denominat GAM, microdisección assistida per gravetat) o transport per catapulta de pressió làser; la generació més recent utilisa una tecnologia basada en la transferència cap a davant induïda per làser (LIFT). En la tècnica de tall i captura, es coloca un capuchón recobert d'un adhesiu directament sobre la secció de teixit finamente tallada (5-8 μm), que descansa sobre una fina membrana (polietileno naftaleno). Un làser IR calfa suaument l'adhesiu del capuchón fusionant-ho en el teixit subjacent i un làser UV talla el teixit i la membrana subjacent. L'entitat membrana-teixit s'adherix ara al capuchón i les cèlules del capuchón poden utilisar-se en aplicacions posteriors (anàlisis de ADN, ARN, proteïnes).