SYBR Green
El SYBR Green és un compost orgànic de fòrmula química C32H37N4S, que forma part del grup de les cianinas asimètriques (fluoróforos 4S) i que s'utilisa en biologia molecular.[1] El SYBR Green no és un agent intercalante, ya que no s'inserta en l'espai entre dos parells de bases, sino que s'associa a la molècula d'ADN interactuant en el clavill menor de l'ADN.
Esta molècula s'introduïx en l'estructura secundària de la doble hèliç de l'ADN i s'acopla energèticament als àcits nucleicos d'este, de manera que s'incrementa notablement la seua taxa d'emissió fluorescent. Este fenomen es coneix com a transferència d'energia per mig de resonància de fluorescència (FRET, per les seues sigles en anglés). El complex resultant ADN-SYBR Green presenta el pico d'absorció en λ = 498 nm i el d'emissió en λ = 522 nm (corresponent a la zona verda de l'espectre, d'ahí el seu nom).
En la tècnica d'electroforesis, el SYBR Green representa una alternativa com a tenyida al bromur d'etidio, ya que és fins a 100 voltes més sensible que este i molt manco perjudicial per a la salut.
Usos
El SYBR Green s'utilisa en vàries àrees de la bioquímica i la biologia molecular. S'ampra com a colorant per a la quantificació d'ADN de doble cadena en alguns métodos de PCR quantitativa o per a la visualisació de l'ADN en l'electroforesis en geles d'agarosa.
Quan s'afig colorant SYBR Green a una mostra nucleotídica, immediatament s'unix a tot l'ADN de doble cadena present en la mostra. Durant la PCR quantitativa, la DNA polimerasa amplifica la seqüència diana que crea els productes de PCR. SYBR s'unix llavors a cada nova còpia d'ADN de doble cadena. Per lo que el resultat és un aument en l'intensitat de la fluorescència proporcional a la cantitat de producte de PCR produït. S'eixecuta en PCR en temps real i aixina es pot quantificar la cantitat de DNA inicial.
Ademés de marcar els àcits nucleicos purs, SYBR Green també es pot utilisar en l'etiquetage de l'ADN dins de les cèlules per a la citometría de fluix i microscopía de fluorescència. En estos casos es requerix el tractament previ en ARNasa per a reduir la cantitat d'ARN en les cèlules.
Vore també
Referències
- ↑ per. «¿Qué és SYBR Green®? - Spiegato» (en és-és). Consultat el 2021-12-05.
- Este artícul conté una traducció derivada de «SYBR Green» de Wikipedia en castellà publicada baix la Llicència de documentació lliure de GNU i la Llicència Creative Commons Reconeiximent-CompartirIgual 4.0 Internacional.