Subclonaje

This image diagrams the procedure of subcloning as outlined to the left.

En biologia molecular, es denomina subclonaje a la tècnica utilisada per a moure un gen o una atra seqüència d'interés des d'un vector orige a un vector de destí.

És important destacar que encara que similars, la tècnica del clonaje i del subclonaje no són lo mateix, puix la segona ya partix d'un gen clonat.

Procediment

Utilisem enzimes de restricció per a extraure el gen d'interés del primer vector. Despuix és purificat d'entre tots els restants i fragments. Una volta purificats, amplifiquem les seqüències per mig de PCR.

Simultàneament utilisem les mateixes enzimes de restricció per a tallar el vector de destí. Tenim que utilisar les mateixes enzimes de restricció per a generar extrems cohesivos complementaris que faciliten la posterior ligación. Posteriorment purifiquem el vector prèviament tallat.

Mesclem el ADN a insertar i el vector tractat en ligasa en una proporció 3:1.

Amplificament del vector producte

El plásmido producte és usualment insertat en una bactèria per a que cada volta que la bactèria es dividixca el plásmido es replique també. Despuix d'unes quantes divisions celulars hi haurà suficient cantitat de plasmido com per a poder recolectar-ho.