Zimografía

La zimografía o zimograma és una tècnica electroforética que permet observar activitat d'enzimes. Es realisa en poliacrilamida i a diferència de les electroforesis de proteïnes en condicions desnaturalisants (SDS-PAGE) es tracta d'utilisar condicions suaus (sense agents reductors) per a evitar la pèrdua d'activitat de les enzimes estudiades.

Alguns eixemples

Activitat de proteasas

La polimerisació de la poliacrilamida es realisa en presència de gelatina soluble. D'esta manera el gel resultant contindrà gelatina (colágeno desnaturalizado).

Després de realisar la correguda electroforética de les mostres el gel es llava en una solució en Salamandra X100 i es incuba en un buffer apropiat que favorix l'activitat de les proteasas. El resultat d'este tipo de geles, és que en la zona a on es va ubicar una proteasa la gelatina haurà segut degradada. Esta degradació es revela tiñendo el gel en colorants que tinguen afinitat per proteïnes, observant-se una zona blanca a on va haver degradació.

Activitat d'enzimes (genèric)

Consistix en realisar una electroforesis en condicions natives (sense detergents ni agents reductors) o semidesnaturalisants (sense agents reductors). Després una volta terminada la correguda electroforética es preincuba el gel en un esmortidor apropiat per a l'enzima en estudi (sense agents desnaturalisants). després el gel es incuba en un atre esmortidor similar al de preincubación pero en el substrat inclós (de preferència fluorescent). El gel és revelat baix una llàntia UV.