Etiquetage de transposones

El etiquetage de transposones, també cridat STM, STTM, transposon taggin en anglés, és una tècnica que permet identificar gens en les bactèries que són essencials per al procés d'infecció en un animal modele. Va ser inventada per David Holden.

Característiques d'està tècnica

• és un método de selecció negativa per a l'identificació de gens de virulència basant-se en la mutació
• és un método ràpit
• utilisa un chicotet número de hospedadores
• requerix un patógeno haploide que serà objecte de mutagénesis per inserció
• infecta al seu hoste com una població mixta
• genera ceps atenuats.
• no requerix cap coneiximent de la naturalea del producte del gen
• només depén dels patrons d'expressió d'un fenotip mutante
• no revela gens essencials

Metodologia

1. Un pool de bactèries és mutageneizado per inserció dels tranposones que porta un "'tag'", una seqüència única que ajuda a identificar-los. Es genera aixina una biblioteca de bactèries mutantes.
2. Este pas es repetix per a diferents "tag", obtenint-se vàries biblioteques cada una d'elles en un "tag" diferent.
3. Es fa un screening in viu de les biblioteques, per a això s'armen distints pooles contenint clons en diferents "tag", que són inoculados en un animal inmunodeprimido
4. S'arrepleguen les bactèries de l'animal i s'identifiquen els "tag" faltantes, és dir els que corresponen als gens necessaris per a la virulència. Note's que bactèries sense estos gens, no poden infectar ni reproduir-se.
5. De la biblioteca original s'alça la seqüència d'estos

D'esta manera es pot conéixer la seqüència dels gens implicats en la virulència.